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Valutazione tossicologica di edulis Euterpe. Un potenziale superfruit da considerare Euterpe edulis polpa presente composto inferiori fenolico totale che in A & ccedil; AI. Euterpe edulis non offre citoprotezione o effetti antigenotossica. astratto Superfruits hanno un alto valore nutritivo per la loro ricchezza di sostanze nutritive, antiossidanti, benefici per la salute comprovati o potenziali e gusto appello. Tuttavia, non esistono criteri scientifici per definire quali frutti sono superfruits. In Brasile, diverse palme hanno un cuore di palma commestibili, il più noto e più ampiamente apprezzata che si chiama Acai (Euterpe oleracea). Euterpe edulis Mart. comunemente chiamato jussara, è una specie sempreverde che cresce nella foresta pluviale. Essendo stato inizialmente consumato sotto forma di succo e polpa, hanno poi stati incorporati come ingrediente in molti alimenti. Una valutazione del rischio per identificare gli effetti negativi per la salute è un prerequisito per portare avanti lo sviluppo di nuovi farmaci, cosmetici e alimenti. Per fare una valutazione tossicologica di E. edulis. nel presente lavoro questo requisito è stato raggiunto da una rete interdisciplinare che ha eseguito analisi di spettroscopia di massa, la biochimica del sangue, genotossicità, saggi di mutazione e di citotossicità bacterial reverse. risultati di mutagenesi positivi sono stati rilevati per la Salmonella typhimurium TA97 a basse dosi, e risultati positivi sono stati ottenuti anche per il saggio degli eritrociti micronuclei dei mammiferi, che indica che la polpa di E. edulis contiene composti con la capacità di indurre effetti mutagenicità e clastogeni / aneugenico. parole 1. Introduzione L'uso della parola & lsquo; superfruit & rsquo; è relativamente recente ed è considerato un nuovo approccio di marketing per promuovere la frutta comuni o rare che possono essere consumati come alimento o utilizzati come ingredienti per i produttori di alimenti funzionali, bevande e nutraceutici. Superfruits hanno un alto valore nutritivo per la loro ricchezza di sostanze nutritive, antiossidanti, benefici per la salute comprovati o potenziali e gusto appello. Tuttavia, non esistono criteri scientifici per definire quali frutti sono superfruits, e per alcuni il prefisso & lsquo; Super & rsquo; è ancora da dimostrare. In Brasile, diverse palme hanno un cuore di palma commestibili, il più noto e più ampiamente apprezzata che si chiama Acai (Euterpe oleracea). Ha una elevata capacità antiossidante ed è stato utilizzato come ingrediente alimentare che rende i contributi funzionali alla dieta al di là della sua composizione nutrizionale di base (Schauss et al 2006. Schauss et al 2009 & # xA0,.. E & # xA0; Jensen et al. 2008), a dimostrazione degli effetti ipocolesterolemizzanti (Souza et al. 2007) e anti-infiammatori attività (Schauss et al. 2010). Euterpe edulis Mart. comunemente noto come Jussara, è una specie sempreverdi dalla foresta pluviale. Le bacche sono mangiati da uccelli, mammiferi e roditori, ed i semi sono utilizzati nei mangimi. La maturazione delle bacche in gruppo è eterogeneo e che si distingue per la colorazione (Fleig e Rigo, 1998). Inizialmente consumato sotto forma di succo e polpa, bacche Jussara vengono ora utilizzati come ingrediente in molti alimenti. La consolidata esperienza di Acai ha servito come guida per la frutta jussara palma, usato come esperimenti commerciali clandestine in Brasile del sud e del sud-est (Santa Catarina, Paranà e S & Atilde; o Paulo e nel sud di Bahia), dove la polpa viene venduto in piccoli pacchetti perchè la palma jussara non cresce a livello locale. E 'ampiamente accettato, soprattutto perché ha un sapore più dolce del Acai (Tib & eacute;. Rio et al 2012). Una valutazione del rischio per identificare gli effetti negativi per la salute è un prerequisito per portare avanti lo sviluppo di nuovi farmaci, cosmetici e alimenti. Il nostro gruppo ha studiato altri nuovi prodotti, ma in questo manoscritto, una complessa rete interdisciplinare e molti sforzi sono stati fatti per identificare la (fito) chimica, tossicologia e farmacologia dei composti attivi presenti in polpa di E. edulis. 2. Materiali e metodi 2.1. origine Pulp e preparazione polpa congelata E. edulis (9%), è stata ricevuta dal JU & ccedil; AI & reg; (Lotto 2010). E 'stato sciolto in tampone fosfato 0,2 & # xA0; M, pH 7,4 (1,5 & # xA0; mL E. edulis 9%: 12.5 tampone fosfato, chiamato & lsquo; soluzione 1 & rsquo;), luce protetta, filtrata con un 0,22 & # xA0 ; micron membrana e mantenuto a 4 & # xA0; & deg; C. Soluzione 1 è stato sciolto in tampone fosfato, con conseguente 0.25, 1, 2,5 e 5 & # xA0; mg polpa / mL E. edulis da valutare nelle prove (25, 100, 250 e 500 & # xA0; mcg / piastra). 2.2. Determinazione del contenuto fenolico totale Il contenuto fenolico totale di E. edulis (polpa) è stato determinato utilizzando il Folin & ndash; metodo Ciocalteu (singelton et al., 1999). Gli estratti sono stati ossidati con Folin & ndash; Ciocalteu, e la reazione viene neutralizzata con carbonato di sodio (20 & # xA0; mg / mL). L'assorbanza del colore blu risultante è stata misurata a 760 & # xA0; nm dopo 60 & # xA0; min. Utilizzando catecolo come standard per i contenuti fenolico totale (2.2 & ndash; 110 & # xA0; mg / ml), il risultato è stato espresso come mg catecolo equivalente / ml di polpa di E. edulis. I dati riportati rappresentano tre repliche. 2.3. Spettrometria di massa Venticinque grammi di polpa di E. edulis è stato estratto tre volte con 50 & # xA0; mL di diversi solventi di polarità (esano, acetato di etile o cloroformio) utilizzando un agitatore orbitale (Tecnal Inc. Brasile) a 250 & # xA0; rpm agitazione per 2 & # xA0; ore a temperatura ambiente (30 & # xA0; & deg; C). L'estratto di ciascun solvente viene evaporato per rimuovere il solvente e poi ridisciolto e si porta ad un volume di 5 & # xA0; mL con diclorometano per GC & ndash; analisi MS. Ogni estratto è stato analizzato utilizzando un gascromatografo Varian (450GC) accoppiato ad un rivelatore selettivo di massa (220ms). 1 & # xA0; ml di estratto è stato iniettato nel gascromatografo utilizzando la modalità split (1,10). La separazione di analiti è stato realizzato utilizzando una colonna capillare VF-5MS (30 & # xA0; m & # xA0; & volte; & # xA0; 0,25 & # xA0; ID mm, 0.25 & # xA0; spessore del film micron). La temperatura del forno è stato programmato per aumentare da 70 & # xA0; & deg; C a 325 & # xA0; & deg; C a 4 & # xA0; & deg; C / min. L'elio è stato utilizzato come gas di trasporto a 1,0 & # xA0; mL / min (flusso costante). La temperatura GC dell'iniettore era 250 & # xA0; & deg; C e la temperatura linea di trasferimento si è tenuta a 275 & # xA0; & deg; C. I parametri di spettrometria di massa per la modalità impatto elettronico (EI) sono stati: ioni di temperatura della sorgente 250 & # xA0; & deg; C, e l'energia degli elettroni 70 & # xA0; eV. I costituenti chimici degli estratti sono stati identificati confrontando i loro indici di ritenzione e facendo computer corrisponda con il National Institute of Standards and Technology (NIST, 3.0) libreria fornita dal computer che controlla il GC & ndash; sistema di MS. 2.4. modelli biologici 2.4.1. ratti Venticinque ratti maschi Wistar (65 & ndash; 105 & # xA0, g), 3 invecchiati & ndash; 4 & # xA0, settimane, privo di agenti patogeni specifici, sono stati ottenuti da cecal (FIOCRUZ, Rio de Janeiro, RJ, Brasile) e sono stati tenuti in gruppi di cinque animali per gabbia. Durante tutto l'esperimento, gli animali sono stati alloggiati in una stanza con un 12: 12 & # xA0; h scuro: ciclo di luce (luci accese a 6 & # xA0; AM) e controllate di temperatura (22 & # xA0; & plusmn; & # xA0; 2 & # xA0; & deg; C) e umidità relativa (53 & # xA0; & plusmn; & # xA0, 2), con accesso illimitato al cibo e all'acqua. La polpa E. estratto edulis è stato diluito al giorno in acqua per ottenere una soluzione fresca per somministrazione gavage intragastrica (18 & # xA0; mg / ml) per garantire ingestione totale. I ratti sono stati assegnati in modo casuale a cinque gruppi a seconda del trattamento e la dose utilizzata. Gli animali sono stati trattati per tre giorni consecutivi e ricevuto quattro diverse dosi di estratto acquoso: 22,5, 45, 90 e 180 e # xA0; mg / kg. Come gruppo di controllo, cinque animali hanno ricevuto solo acqua fresca. Le procedure utilizzate per la movimentazione degli animali erano in conformità con i principi etici in Animal Research (Comitato Etico, UERJ / Ibrag, CEUA / 057/2010) adottati dal Collegio brasiliano per la Sperimentazione Animale secondo le linee guida dell'Associazione Americana di Psicologia per Ethical condurre nella cura e uso degli animali (Consiglio nazionale delle Ricerche, 2011) e la Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (8 ° edizione), Washington, DC: The National Academies Press. 2.4.2. Gli esseri umani Lo studio è stato eseguito su sei, i volontari non fumatori sani (quattro maschi e due femmine) di età compresa tra 20 e 40. Cinque dei volontari ingerito una singola dose giornaliera di 300 & # xA0; polpa di frutta mL E. edulis (9%) su tre giorni consecutivi. Il sangue è stato prelevato dai volontari prima e dopo l'ultimo integratore (24 & # xA0; h). Il sangue è stato poi incubato con controlli positivi e utilizzato nel SCGE (Single Cell elettroforesi su gel) saggio, o Comet assay (Torbergsen e Collins, 2000). 2.4.3. Coltura cellulare cellule RAW264.7 macrofagi come il mouse sono stati ottenuti dalla American Type Culture Collection (Manassas, VA). Le cellule sono state mantenute in Dulbecco & rsquo; s Modified Eagle Medium (DMEM, GIBCO & reg ;, USA) contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS) più 100 & # xA0; mg / streptomicina ml e 100 & # xA0; U / mL di penicillina a 37 & # xA0; & deg; C in una atmosfera di aria 5% CO 2/95%. cellule logaritmica fase sono stati utilizzati per tutti gli esperimenti. 2.4.4. batteri ceppi di Salmonella typhimurium TA98, TA97, TA100 e TA102 dal nostro magazzino sono stati utilizzati come descritto da Maron e Ames (1983) per il saggio di mutagenicità (al. Aiub et 2009). 2.5. biochimica del sangue I ratti, a digiuno per 16 & ndash; 19 & # xA0, h il giorno autopsia, sono stati anestetizzati con etere, e campioni di sangue sono stati raccolti dalla aorta addominale. Plasma e parametri sierici di chimica clinica sono stati misurati utilizzando i protocolli proposti dalla Quibasa & ndash; Qu & iacute; mica B & aacute; sica Ltda. I kit incluso aspartato aminotransferasi (AST), alanina aminotransferasi (ALT), HDL colesterolo diretta (HDL), il colesterolo LDL diretta (LDL), fosfatasi alcalina (ALP), albumina, proteine totali (TP) e glucosio analisi.
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